Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身抗体到消失1型式肝炎临床深入研究呕吐的困难重重数万人在孩童时期就有很差的叙述，多个胰脏自身抗体阳性的孩童中会有70%在小鼠冗余后10年内患有肝炎，而随访15年的孩童这一数量增加到84%。来得之下，占临床深入研究1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的患病机制还没有得到充分的深入研究。

日益多的人开始可用分期系统来并不一定1型式肝炎的困难重重：个本体在消失多种胰脏自身抗体时进入第1阶段，消失血糖异常时进入第2阶段，消失呕吐时进入第3阶段。一些多发胰脏自身抗体阳性的个本体，在1期和2期，困难重重较比较慢，并发展为患病的1型式肝炎。我们早先叙述了一四组在首次探测到多种胰脏自身抗体抽样后至少10年无肝炎的短时间困难重重者，这四组病征人数少，但也就是说特征非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞内反可不在困难重重比较比较慢的病征中会也就是说不存在，但在未来会患病和仍然存在的肝炎病征中会很容易探测到。这可能会表明，与困难重重病征来得，这些病征诱发反可不的闭环提升。

早期深入研究表明，尽管闭环性T细胞内(Treg)数量正常，但肝炎病征存在一些功能缺陷，其中会有数对IL-2的反可不灵活性增大。此外，肝炎病征中会的效可不CD4+T细胞内可能会对闭环突显抵抗性，表现为效可不T细胞内的依赖性弱化，自然产生的Treg和本排泄产生的作用于Treg，以及抗体个人经历的CD4+T细胞内中会IL-2反可不弱化。本深入研究的目的是叙述了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在大群极比较比较慢困难重重者中会的也就是说特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以成年人为基础的垂直深入研究，在21岁以下确诊的病征亲属中会检查1型式肝炎的危险因素。我们早先叙述了仍然比较比较慢困难重重者的也就是说特征，他们保持多重胰脏自身抗体阳性少于10年，但没有消失肝炎的临床深入研究呕吐，比较慢性或非受累诱发。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量肝脏抽样的比较比较慢困难重重者纳入T和B细胞内功能数据分析。在目前的深入研究中会，8名比较慢困难重重者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身抗体阳性。所有的参与者都正处于1型式肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗体对某些抗体的阳性反可不，然而，一名病征仍然正处于2期至少6年，但没有消失临床深入研究呕吐，一名病征被诊断为肝炎，该受试者72岁，在收集实验抽样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中会对该供本体展开了单独风险评估。除去外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内奥义和T细胞内依赖性检验风险评估供本体中会Treg的频数万人、基因型式和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)展开无监督聚类数据分析，风险评估Treg基因型式。

结果：与肥胖症供本体来得，来自比较慢困难重重本体的梦境CD4+T细胞内的监督聚类显示，触发的梦境CD4+ Treg频数万人增加，与糖皮质激素作用于的TNFR相关肽(GITR)表达出来增加有关。一名HbA1c上升时的病征与困难重重比较比较慢者和冗余的对照四组来得，Treg谱有所各有不同。功能数据分析表明，与肥胖症供本体来得，来自比较比较慢困难重重本体的Treg介导的CD4+效可不T细胞内依赖性突出破损。表现为对效可不CD4+T细胞内CD25和CD134表达出来的依赖性增加。

左图1 深入的基因型式数据分析显示，CD4+Treg亚型式在比较慢困难重重描述符中会增加。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物表达出来检验出10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)可用9个各有不同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个节点代表一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点四组周围装裱。每个节点中会的糕点左图指出单个记号的表达出来级别。(b)每个元聚类的热左图，以显示整本体记号表达出来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化成左图，以及FlowSOM标记的每个元簇的沙质。(e-l)比起金属量为每个metacluster箱该线左图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。橙色格子代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组下标秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 可用CITRUS的预测模型式证实，Treg频数万人的增加是困难重重比较比较慢的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来展开除去，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及供本体SP 606(橙色)中会CD25+ cd127的频数万人汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯孙子集的箱该线左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，箭头突出的簇被标记为SP和HD描述符间的各有不同。(j)箱该线左图显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起金属量(数量)。(k)直方左图显示每个簇的基因型式(粉红色)和Treg记号比起表达出来与背景表达出来(橙色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会记号的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组下标秩检验

左图3 与肥胖症献血者来得，困难重重比较比较慢者梦境treg的GITR增加。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表达出来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表达出来热左图(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来联结，显示直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon分组下标秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供本体有数，p< 0.05(橙色)供本体SP 606和冗余的HD不有数在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表达出来，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)联结，显示直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组下标秩检验

左图4 来自比较比较慢困难重重的CD4+ treg细胞内掌控效可不CD4+T细胞内的灵活性增大。SP四组用橙色的该线和格子指出，HD四组用红色的该线和格子指出，橙色的该线/格子指出供本体sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(可不答者)被记号为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，人才培养3当晚展开流式细胞内奥义探测。(a-d)与CD4+可不答者比起可不的treg人才培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD可不答者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。可用阳性对照(触发的响可不细胞内不含treg)测算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效可不CD4+T细胞内对比较比较慢困难重重的T细胞内活化的依赖性更敏感。SP四组用橙色的该线和格子指出，HD四组用红色的该线和格子指出，橙色的该线/格子指出供本体sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(可不答者)被cfsel记号，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，人才培养3当晚展开流式细胞内奥义(CD25反染)和细胞内因孙子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606可不答者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分数万人(b)。(c,d) CD25依赖性百分数万人(c)和CD134依赖性百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比较比较慢困难重重孙子的活化梦境CD4+Treg在GITR表达出来中会得到了扩展到和多样，重申了进一步深入研究Treg在1型式肝炎几率个本体中会的表征的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28